Главная История Кантепарин Услада Стоимость Специалистам Опыт Вопросы Испытания Программа Лицензии Статьи Эпилог Где взять?

Антимутагенное действие препарата ВЛАИРИН
на клетки людей, проживающих на территориях,
загрязненных радионуклидами.

Целью настоящей работы было изучение радиопротекторного (антикластогенного) действия препарата Влаирин на лимфоцитах людей, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами (в Ново-зыбковском районе Брянской области, 2 зона), а также разработка клеточных и молекулярно-генетических основ применения ВЛАИРИНА при лечении людей, подвергающихся острому или хроническому облучению редкоионизирующей радиацией.

Исследование выполнено на клетках крови детей как клинически здоровых доноров (6 человек), так и пациентов с различными заболеваниями (10 человек), проживающих в течение 3-9 лет на территориях с уровнем радиационного загрязнения от 3,2 до 26,3 Ки/км в результате аварии на Чернобыльской АЭС. В настоящее время одним из объективных критериев оценки способности клеток противостоять повреждающему действию редкоионизирующей радиации является радиоадаптивныи ответ (РАО) клеток (Македонов и др.1996). Явление РАО заключается в том, что в результате предобработки клеток малыми дозами ионизирующей радиации (0,1-10 Рад) снижается уровень структурных мутаций хромосом, индуцированных большими дозами (2-4 Гр.). Поэтому в наших исследованиях радиопротекторное действие препарата Влаирин изучалось в сравнении с РАО, исследуемых клеток. В качестве источника малой дозы радиации использовали бета-излучения Н - тимидина (0,1 мкК/мл) в течение 20 часов. В качестве большой дозы использовалось гамма-облучение в дозе 2 Гр.

Лимфоциты крови культивировали in vitro по стандартной методике. Стимуляцию (бласттрансформацию) лимфоцитов проводили посредством фитогемагглютинина (ФГА). Клетки облучали гамма-квантами в дозе 2 Гр. через 20 часов после начала культивирования и фиксировали через 52 часа. Обработку клеток препаратом Влаирин в концентрации 1х10 проводили в течение 16 часов перед облучением. Анализировали частоту и спектр аберраций хромосом (АХ) перед облучением. Данная экспериментальная система дает возможность дифференцировать эффекты внутриклеточного облучения инкорпорированными радионуклидами от внешнего гамма-облучения: АХ хроматидного типа являются результатом облучения радионуклидами в S-фазе митотического цикла; АХ хромосомного типа - результат внешнего облучения редкоионизирующей радиацией в G1-фазе, т.е. гамма-облучения через 20 часов после стимуляции клеток ФГА.

Основой тест-системы является метод учета хромосомных аберраций (стандартный метод), индуцированных гамма-квантами в лимфоцитах крови человека, культивируемых in vitro.

Лимфоциты крови культивируют in vitro по стандартной методике. Стимуляцию (бласттрансформацию) лимфоцитов проводят посредством фитогемагглютинина (ФГА). Клетки облучают гамма-квантами в дозе 2 Гр через 20 часов после начала культивирования и фиксируют через 52 часа. Обработку клеток препаратом Влаирин в концентрации 1х10-6 проводят в течение 16 часов перед облучением.

Анализируют степень бласттрансформации лимфоцитов (по критерию "да" или "нет") и частоту аберраций хромосом (АХ). Радиопротекторное действие препарата Влаирин изучается в сравнении с радиоадаптивным ответом РАО исследуемых клеток. Явление РАО заключается в том, что в результате предобработки клеток малыми дозами ионизирующей радиации (0,1-10 Рад) снижается уровень структурных мутаций хромосом, индуцированных большими дозами (2-4 Гр). Поэтому в наших исследованиях в качестве источника малой дозы радиации использовали бета-излучения Н3-тимидина (0,1 мкК/мл) в течение 20 часов. В качестве большой дозы использовалось гамма-облучение в дозе 2 Гр.

Анализировали частоту и спектр аберраций хромосом (АХ) перед облучением. Данная экспериментальная система дает возможность дифференцировать эффекты внутриклеточного облучения инкорпорированными радионуклидами от внешнего гамма-облучения: АХ хроматидного типа являются результатом облучения радионуклидами в S-фазе митотического цикла; АХ хромосомного типа - результат внешнего облучения редкоионизирующей радиацией в G1-фазе, т.е. гамма-облучения через 20 часов после стимуляции клеток ФГА.

Варианты опыта и критерии оценки:

  1. КОНТРОЛЬ - необлученные клетки, частота АХ = а - спонтанный уровень.
  2. КЛЕТКИ + ГАММА (2 Гр), частота АХ= b - индуцированный уровень.
  3. КЛЕТКИ + ГАММА (0,1)+ГАММА (2Гр) (Вариант РАО),
    а) частота АХ = 60-70%b - здоровый донор
    б) частота АХ = b повреждение систем репарации ДНК
  4. КЛЕТКИ + ГАММА (2Гр)+ВЛАИРИН
    а) частота АХ = 60-70%b при варианте 3(а) - здоровый донор
    б) частота АХ = 60-70%b при варианте 3(б) - радиочувствительность повышена
    в) отсутствие бласттрансформации - сильное повреждение систем репарации, большая радиочувствительность.

Результаты экспериментов, проведенных на лимфоцитах 5 клинически здоровых доноров, проживающих от 3 до 9 лет на загрязненных радионуклидами территориях, представлены в табл.1. Из табличных данных следует, что у всех доноров обнаруживается радиозащитный эффект как после облучения клеток малыми дозами радиации - коэффициент защиты (КЗ) = 0,33 + 0,19, так и после обработки их препаратом Влаирин КЗ = 0,55 + 0,57. Обращают на себя внимание два обстоятельства: 1) незначительный разброс данных по РАО в этой группе доноров, что выражается в небольшом отклонении от средней величины КЗ; 2) высокая эффективность защиты клеток от острого гамма-облучения препаратом Влаирин - КЗ = 0,55, то есть препаратом Влаирин снимается 55% структурных мутаций хромосом.

Результаты экспериментов, проведенных на лимфоцитах детей с различной патологией представлены в таблице 1. Из табличных данных следует, что 10 доноров из загрязненных радионуклидами районов делятся на 3 группы по способности к защите клеток механизмом РАО и эффективности восстановительных процессов в клетках, предобработанных влаирином.

Группа N 1. 3 пациента (Ad 49,50 и 67) характеризуются:

1) сенсибилизацией малой дозой облучения, что приводит к увеличению мутагенного эффекта последующим гамма-облучением в дозе 2 Гр, иными словами имеет место явление противоположное РАО;
2) блокировкой бласттрансформации лимфоцитов препаратом Влаирин.

Группа N 2. 4 пациента (Ad 59, М 19,20 и22) характеризуются: 1) отсутствием влияния малой дозы облучения на выход структурных мутаций хромосом, индуцированных гамма-облучением в дозе 2 Гр (РАО отсутствует); 2) предрадиационная обработка лимфоцитов препаратом Влаирин приводила к эффективному снижению выхода структурных мутаций хромосом, индуцированных гамма-облучением в дозе 2 Гр. Следует отметить, что радиочувствительность клеток к острому облучению у пациентов в группах N1 и N2 практически одинакова и составляет соответственно 70,3 и 72,5 аберраций на 100 клеток. Группа N 3. 3 пациента (Ad 58, 69 и 72) характеризуются как высоким РАО (КЗ=0,58), так и высоким защитным эффектом влаирина (КЗ=0,51).

Таким образом, из 10 больных детей, проживающих в зоне, загрязненной радионуклидами, у 7 нарушена система защиты клеток, индуцируемая у здоровых людей малыми дозами радиации. Причем у четверых из этих больных клетки восстанавливают способность к радиозащите с помощью препарата Влаирин при нулевом РАО, в то время как у оставшихся троих, обнаруживающих вместо РАО радиосенсибилизацию, препарат Влаирин блокирует клетки в G -фазе митотического цикла. На основании полученных данных можно предположить, что одним из механизмов действия препарата Влаирин является элиминация сильно поврежденных клеток из клеточной популяции.

ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты, полученные в данной работе показали, что клетки здоровых доноров из районов, загрязненных радионуклидами, обладают эффективной (т.е. выраженной у всех обследованных) системой радиозащиты. Эта система, обнаруживаемая по способности клеток к снижению уровня индуцированных острым гамма-излучением структурных мутаций хромосом, выражена как в виде высокого РАО (среднее значение КЗ=0,33), так и еще более эффективной защитой от гамма-излучения посредствам влаирина (КЗ=0,55). Таким образом, учитывая, что Влаирин является абсолютно нетоксичным и безвредным средством, его применение целесообразно в качестве радиозащитного препарата для практически здоровых людей.

Результаты, полученные в данной работе, показали, что защитная реакция, оцененная по наличию РАО в клетках больных детей из районов, загрязненных радионуклидами, является нарушенной у большинства доноров. По реакции клеток на предоблучение малыми дозами радиации нарушение их радиозащитной способности можно подразделить на две степени: 1 степень - тяжелые нарушения (возможно необратимые) - РАО отсутствует, происходит радиосенсибилизация клеток (т.е. повышается уровень индуцированных АХ); 2 степень - нарушения средней тяжести - РАО отсутствует, но радиосенсибилизации не происходит. При нарушении механизмов антимутагенеза 2 степени препарат Влаирин возвращает клеткам утраченные способности к радиозащите практически до уровня здоровых доноров. Таким образом, для людей с нарушениями радиозащитных способностей клеток 2 степени препарат Влаирин представляет собой уникальное лекарственное средство, позволяющее восстановить работу механизмов антимутагенеза.

При тяжелых нарушениях механизмов антимутагенеза 1 степени препарат Влаирин в модельной системе лимфоцитов крови человека, культивируемых in vitro, блокирует бласттрансформацию клеток фитогемагглютинином. Это означает, что Влаирин запрещает деление клеток с глубокими нарушениями механизмов антимутагенеза. Возможно, что на организменном уровне такая уникальная способность влаирина позволит привести к глубокому оздоровлению организма посредством нивелирования клеток, некомпетентных к адекватным межклеточным взаимодействиям и правильной передаче информации.

Полученные данные позволяют использовать препарат Влаирин в модельной системе лимфоциты крови человека, культивируемые in vitro, в качестве тест-системы для оценки возможного профессионального риска для персонала, работающего с радиоактивностью. Для этого необходимо взять у обследуемого анализ крови (3-4 мл крови из вены) и проанализировать ее на способность к бласттрансформации при обработке влаирином после стимуляции ФГА. По степени выраженности бласттрансформации можно оценить радиочувствительность человека. Отсутствие бласттрасформации после обработки клеток влаирином будет свидетельствовать о серьезных нарушениях механизмов антимутагенеза у человека и соответственно о его высокой радиочувствительности.

ВЫВОДЫ

1. Система защиты генома от индукции структурных мутаций хромосом острым гамма-излучением, индуцируемая малыми дозами радиации (РАО) и препаратом Влаирин эффективно функционирует в клетках клинически здоровых доноров, проживающих в районах, загрязненных радионуклидами.

2. У большинства доноров, проживающих в районах, загрязненных радионуклидами и страдающих различными заболеваниями (хроническими формами), РАО отсутствует.

3. Препарат Влаирин целесообразно использовать для лечения как клинически здоровых доноров, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, так и для пациентов, с различными хроническими заболеваниями.

4. Препарат Влаирин может быть использован в качестве средства, нивелирующего клетки с тяжелыми повреждениями систем антимутагенеза из клеточной популяции.

5. Препарат Влаирин позволяет создать тест-систему для быстрого определения профпригодности и степени профессиональной безопасности для людей, работающих в зонах повышенного риска радиоактивного излучения.

Вверх
Hosted by uCoz